激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据、目前分子细胞生物学的分析仪器。
主要用于观察活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化,定量分析,以及实时定量测定等。接下来由百贺公司为您描述激光共聚焦显微镜的样品要求及缺点。
一、激光共聚焦显微镜样品要求
样品经荧光探针标记。固定的或活的组织。固定的或活的贴壁培养细胞应培养在Confocal专用小培养皿或盖玻片上。悬浮细胞,甩片或滴片后,用盖玻片封片。
载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,盖玻片应光洁,厚度在0.17mm左右。标本不能太厚,如太厚激发光大部分消耗在标本下部,而物镜直接观察到的上部不能充分激发。尽量去除非特异性荧光信号。封片剂多用甘油:PBS混合液(9:1)。
二、激光共聚焦显微镜缺点
标记染料的光漂白:为了获得足够的信噪比须提高激光的强度;而高强度的激光会使染料在连续扫描过程中迅速褪色。光毒作用:在激光照射下,许多荧光染料分子会产生单态氧或自由基等细胞毒素。限制扫描时间、激发光强度,以保持样品的活性。
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